一、检测原理及技术

　　1、电学检测原理及技术

　　①电阻抗法原理

　　②仪器的组成和功能

　　信号发生器

　　放大器

　　阈值调节器

　　甄别器

　　整形器

　　计数器

　　放大→阈值调节→甄别→整形→计数

　　③电阻抗原理进行血细胞计数和分类原理图

　　特点：是最早的血细胞计数理论

　　缺点：不能对单个细胞进行系统分析，得出的参数为群体平均值。

　　2、射频电导法

　　射频指射频电流，是每秒变化大于10000次的高频交流电磁波。电导性即电的传送性能。高频电流能通过细胞壁,渗入细胞膜脂质层可测定细胞的导电性，提供细胞内部化学成分、细胞核和细胞质、颗粒成分等特征性信息。

　　用途：特别有助于鉴别体积虽相同、但内部结构性质不同的细胞（或相似体积的颗粒）。

　　3、光（化）学检测原理

　　激光散射法

　　①原理：处理细胞（稀释、染色、球形化）→ 通过石英毛细管（激光束照射）→ 细胞产生与其特征相应的各种角度的散射光 → 周围有不同角度的信号检测器

　　不同结果角度代表的意义如下：

　　前向散射光（FSC）:数量和表面体积大小

　　侧向散射光（SSC）:颗粒、细胞核等复杂性

　　散射荧光（FL）:FL1绿色，FL2橘红色，FL3红色

　　激光散射法是现代五分类血液分析仪的主要检测原理之一。

　　②基本组成

　　光源：气体激光（氦-氖、氩气等）、固体激光（半导体）、钨光源（多色光）

　　鞘流：维持颗粒于液流中央，顺序、单个、恒速向前流动，即流体动力学聚焦

　　细胞悬液：被检测细胞（颗粒）的悬液，由气压导入流动池

　　光检测器：接受来自各种角度的散射光或吸收光信号，并转换成相应特征的电信号

　　功能水平上对单个细胞进行定量分析，可高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，是最先进的细胞定量分析技术。

　　③网织红细胞检测原理

　　利用流式细胞仪（flow cytometer,FCM）的方法进行网织红细胞计数。因网织红细胞的胞质中尚残留RNA,可与丫啶橙、哌若宁-Y、噻唑橙等染料结合，应用FCM测量发出的特定颜色荧光，进行RNA定量。

　　分光光度法

　　①原理：遵循Lambert-Beer比色定律，即吸光度A与液体物质浓度C成正比。

　　②组成：单色光源、检测池和比色容器、光检测器。

　　③血红蛋白测定：溶血剂→ 红细胞溶解 → Hb → 与溶血剂中某些成分结合 → 稳定的血红蛋白衍生物 → 530～550nm → 比色。

　　4、不同的仪器组合应用电学、光、化学检测技术

　　血液分析仪常用检验参数的原理和技术

　　白细胞五分类计数及相关参数检测

　　①过氧化物酶（peroxidase）染色通道检测原理

　　②体积、电导和光散射（VCS）法

　　VCS：Volume，Conductivity，lightScatter

　　电阻抗技术 →细胞体积、数量

　　电导技术→ 内部结构性质不同的细胞

　　光散射技术 →细胞内的颗粒性、核分叶性、核表面结构

　　VCS技术下各种白细胞群的特征

　　③多角度偏振光散射法（MAPSS）

　　血标本经鞘液稀释后→WBC近似自然状态→Hb溢出，鞘流水分子则进入RBC →不干扰白细胞检测→多角度偏振光散射法分4个角度检测

　　0°：反映细胞大小，同时检测细胞数量

　　7°：反映细胞内部结构及核染色质的复杂性。

　　90°：反映细胞内部颗粒及分叶状况。

　　90°D：在光散射过程中，嗜酸性粒细胞颗粒丰富，可去偏振光，与中性粒细胞鉴别。

　　优点：可鉴别白细胞亚群、异常细胞类型；白细胞分类不受有核红细胞、血小板凝聚、不溶解红细胞和细胞碎片等干扰物质影响。

　　成熟红细胞系列参数检测原理

　　电阻抗法

　　流式细胞术、鞘流电阻抗法

　　流式细胞术激光散射法

　　电阻抗法和光散射法

　　血小板系列参数检测原理

　　电阻抗法

　　流式细胞激光核酸荧光染色和电阻抗法

　　激光散射法

　　固体激光散射法、电阻抗法和单克隆抗体荧光染色散射法

　　网织红细胞系列参数检测原理

　　非荧光染料染色法：新亚甲蓝

　　荧光染料染色法：噁嗪、碱性槐黄O、聚次甲基、噻唑橙、氧氮杂芑750等。

　　有核红细胞系列参数检测原理

　　VCS法

　　流式激光/荧光染色法

　　白细胞计数和分类通道衍生法

　　阻抗法和噻唑橙荧光染色流式细胞术